Работа выполнена на кафедре психиатрии Ташкентского государственного медицинского института (ректор-профессор Даминэв Т. А., зав. кафедрой - профессор Алимов X. А.), в лаборатории «Биофизика клетки» Института физиологии АН УзССР (директор-академик АН УзССР Ташмухамедов Б. А.) и Институте химии растительных веществ АН УзССР (директор-профессор Арипов X. Н.)
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Вертоградова О. П.
доктор биологических наук, профессор Лидеман Р. Р.
доктор медицинских наук, профессор Стукалова Л. А.
Ведущее учреждение — Всесоюзный научно-исследовательский институт общей и судебной психиатрии им. В. П. Сербского МЗ СССР.
Защита состоится «11» марта 1991 г. на  заседании специализированного совета Д 001.30.01 при Всесоюзном научном центре психического здоровья АМН СССР по адресу: Москва, Каширское шоссе, 34.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦПЗ АМН  СССР.
Автореферат разослан «»    1991 г.

 

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук
 
ЛОСЕВА Т. М.
 
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Фундаментальные достижения в области биологии, биохимии, биофизики существенно повлияли на
развитие исследований в области психиатрии и привели к появлению биологического направления изучения патогенеза шизофрении. Благодаря биологическим поискам сущности шизофрении было
выявлено, что кровь больных шизофренией способна изменять поведение тренированных крыс J.R.Bergen, 1967; С.A.Д Winter и
L.Flataker ,1963), вызывать психические расстройства у здоровых добровольцев (R&.Heath, 1954), приводить к гемолизу куриных эритроцитов и увеличению коэффициента лактат/пируват
(С.Е.Frohman, 1967; А.В.Снежневский и М.Е.Вартанян, 1975;
Д.В.Лозовский, 1971). Поиски причин указанных нарушений привели к обнаружению в крови больных шизофренией белкового вещества - "фактора плазмы" или "сывороточного фактора". Дальнейшее
изучение свойств биологически активного сывороточного фактора
показало универсальность его действия, которая выражалась в
способности повреждать клеточные мембраны (Р.Р.Лидеман, 1972;
Г.И.Коляскина, 1975; И.В.Домашнева, 1971; Е.И.Солнцева, 1973;
Л.Л.Прилипко, 1982).        
Попытки исследователей, направленные на выделение из крови больных шизофренией сывороточного фактора и изучение его физико-химической природы, не увенчались успехом. Несмотря набольшую интенсивность этих исследований, они не привели к обнаружению "шизофренического токсина". С одной стороны, полученные результаты, по целому ряду причин оказались весьма неоднозначными, а порой и диаметрально противоположными, с другой стороны, до настоящего времени остается неясным вопрос о роли и месте сывороточного фактора в этиопатогенезе шизофрении, источнике его происхождения и в какой степени сывороточный фактор сопровождает болезнь на всем ее протяжении. Еще более разноречивы мнения исследователей о механизме действия сывороточного фактора на мозговые структуры.
Отсутствие единой точки зрения на проблему сывороточного фактора, на наш взгляд, объясняется, во-первых, тем, что, в исследованиях, направленных на поиск специфической, биологически активной белковой субстанции, имеющей определенное значение в патогенезе шизофрении, применялась цельная сыворотка. Во-вторых, используемые для решения проблемы сывороточного фактора тест-системы были биологически неоднородными, что также приводило к неоднозначным результатам.
Таким образом, проблема сывороточного фактора переросла в значительно более широкую проблему биологических особенностей сыворотки крови при шизофрении.
Необходимо подчеркнуть, что важность изучения природы шизофрении диктуется ее распространенностью, тяжестью течения, неблагоприятным исходом с ранней инвалидизацией. Поэтому изучение сущности этого заболевания имеет очень большое значение для решения принципиальных практических и теоретических вопросов психиатрии.
Тема диссертации входит в государственную программу научных исследований (государственная регистрация № 01860036328,
шифр 27.01).   
Цель исследования. Основная цель настоящей работы заключалась в выделении из сыворотки крови больных шизофренией белковой субстанции, обладающей биологической (мембранной) активностью, и ее клинико-биологическое изучение.

Задачи исследования.

В соответствии с поставленной целью основные задачи исследования сводились к следующему:

1. Выделение из сыворотки крови больных шизофренией белкового вещества, биологическая активность которого выявлялась при помощи надежной тест-системы, позволяющей количественно оценивать степень биологической активности в зависимости от клинического состояния больных.
2. Исследование мембраноактивных свойств сывороточного белка больных различными клиническими формами и типами течения шизофренического процесса.
3. Влияние коррелятивной связи между результатами исследования мембраноактивных СВОЙСТВ сыворотки крови больных шизофренией и основными клиническими характеристиками заболевания, имея в виду клиническую форму и тип течения.
4. Изучение физико-химических свойств мембраноактивного белка сыворотки крови больных шизофренией, включающее определение молекулярной массы, аминокислотного состава, термолабильности, спонтанной инактивации  вторичной структуры.

Научная новизна работы.

Научная новизна работы определяется ее основными результатами, В работе впервые в психиатрии использован метод выявления биологической активности при помощи искусственных бислойных липидных мембран, являющихся моделью биологических мембран, и метод изучения вторичной структуры мембраноактивного белка больных шизофренией при помощи спектрополяриметра.

В процессе выделения из крови больных шизофренией мембраноактивного белка был получен белок с высокой степенью чистоты.
 
 
Гомогенность его доказана как методом аналитического электрофореза в полиакриламидном геле, так и определением NH2-концевой аминокислоты. Это позволило определить молекулярную массу и аминокислотный состав этого белка.
Кроме того, в работе показано, что мембраноактивный белок является двухкомпонентным белковым соединением. Используя молекулярные фильтры, удалось разделить низкомолекулярную часть от высокомолекулярной. Доказано, что низкомолекулярный компонент  белка является ответственным за мембранную активность, тогда как высокомолекулярный компонент такой активностью не обладал.
В диссертации впервые изучены физико-химические особенности низкомолекулярного компонента мембраноактивного белка - молекулярная масса, аминокислотный состав, вторичная структура, способность к каналообразованию в мембранах. По уровню, результаты диссертации являются новыми, имеющими важное народнохозяйственное значение. Теоретическая и практическая значимость. В работе выявлена способность глобулиновой фракции сыворотки крови больных шизофренией увеличивать удельную проводимость бислойной липидной мембраны (БЛМ), интенсивность которой зависит от клинических параметров заболевания. Указанной способностью глобулиновая фракция сыворотки крови больных другими психозами и здоровых лиц не обладала. Эти различия могут служить дополнительным тестом для диагностики шизофрении.
Кроме того, выявленные в работе различные показатели биологической активности сывороточного фактора при различных конических проявлениях заболевания позволяют логично обосновывать   существующую верификацию шизофрении.
 

Изучение мембраноактивного белка позволило доказать его двухкомпонентность и исследовать физико-химические свойства низкомолекулярного компонента белка. В работе показано, что в низкомолекулярном компоненте происходят существенные информационные перестройки и наблюдается ярко выраженное изменение вторичной структуры этого компонента. Эти данные указывают на высокую ценность результатов диссертации.
Реализация (внедрение). Результаты работы имеют прикладное значение и могут быть использованы в масштабах отрасли.
Метод изучения мембраноактивных свойств сывороточного белка больных шизофренией при помощи БЛМ, являющихся надежной тест-системой, может быть рекомендован для его использования во всех биохимических лабораториях психиатрических учреждений. Результаты исследования этим методом могут служить дополнительным критерием для комплексной диагностики шизофрении.
Кроме того, выявленные с помощью спектрополяриметра выраженные конформационные сдвиги в структуре низкомолекулярного компонента сывороточного белка больных шизофренией требуют дальнейшего более глубокого изучения с поиском причины этого феномена.
Продолжение научных исследований по указанной проблеме осуществляется на кафедре психиатрии Ташкентского государственного медицинского института № I, Институте физиологии АН УзССР и Институте химии растительных веществ АН УзССР.
Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции врачей Городской клинической психиатрическое больницы ГУЗ Ташгорисполкома (1986 год), на заседании Республиканского научного общества невропатологов и психиатров Узбекистана (1987 год), на П съезде невропатологов и психиатров Узбекистана (1987 год), на Международном симпозиуме молодых ученых, посвященном вопросам судебной психиатрии -ВНИИ общей и судебной психиатрии им. В.П.Сербского (стендовый доклад, 1988 год).  

Публикации.

Материалы диссертации опубликованы в восьми научных статьях в республиканских и центральных изданиях.
Структура диссертации. Диссертация изложена на 200 страницах машинописного         текста, из них 162 страницы основного текста. Она состоит из введения, обзора литературы, глав собственного исследования, заключения, выводов, перечня использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 185 отечественных и 127 зарубежных работ. Всего использовано 312 литературных источников. Работа иллюстрирована 26 рисунками и 4 таблицами.
 Материал и методы исследования. Были обследованы 104 больных различными клиническими формами и типом течения шизофрении, 15 больных психозами нешизофренической этиологии и 37 практически здоровых лиц. Клиническое наблюдение и исследование больных проводилось в Городской клинической психиатрической больнице Главупрздрава Ташгорисполкома в период с 1979 года по 1990 год.


Для обследования были взяты только те больные, у которых психический статус в момент госпитализации характеризовался продуктивной симптоматикой и где можно было в первую очередь думать о шизофреническом процессе, Уточнение особенностей течения и состояния больных в каждом случае осуществлялось автором после исследования сыворотки крови.
Оценка формы заболевания и статуса больного проводилась в соответствии с классификацией форм шизофрении, предложенной А.В.Снежневским и сотрудниками Института психиатрии АМН СССР (1960,1975,1985 гг.). Согласно этой классификации, клинический материал, представленный больными шизофренией, характеризовался типом течения и клиническими проявлениями, при-водимыми в таблице I.   
Вторую группу исследованных составили 15 больных, из которых у 8 был диагностирован алкогольный делирий. У  остальных 7 больных при госпитализации предполагалась шизофрения, но в процессе клинического наблюдения и исследования этот диагноз был исключен.
Третья группа была представлена практически здоровыми. Это - студенты медицинского института и медицинские работники.   
Для выделения из сыворотки крови больных шизофренией биологически активного сывороточного белка и аналогичного белка у представителей П- и Ш групп был использован метод ионообменной хроматографии на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (Т.Дэвени, Я. Гергей, I97S).
Для очистки биологически активной белковой фракции и получения сывороточного α2-глобулина в очищенном виде использовался метод ппепапативного диск-электрофореза (Г.Маурер, 1971).   

Таблица № 1
Клиническая характеристика обследованных больных шизофренией

Гомогенность мембраноактивного белка -  α2-глобулина определяли методом аналитического электрофореза в полиакри- . ламидном геле (Г.Маурер, 1971), способностью вызывать анти-тела (Т.Дэвени, Я.Гергеи, 1976) и методомопределения  NH2-концевой аминокислоты (Protein sequence dermination, 1975).
В качестве теста для выявления биологической активности сывороточного α2-глобулина были использованы искусственные бислойные фосфолипидные мембраны - БЛМ (R.Mueller, D.Rubin, 1963).
Для разделения мембраноактивного белка и аналогичного белка здоровых людей на двухкомпонентную систему использовали мембранные концентраторы ФМ-2 отечественного производства с молекулярными фильтрами "Владипор" различной разрешающей способности.
Для определения физико-химических свойств мембраноактивного α2-глобулина   использовали аминокислотный анализатор., фирмы "Бекман" (США) и спектрополяриметр Jasep J. (Япония).
Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили параметрическим методом.
Выделение мембраноактивного белка из  сыворотки крови больных шизофренией.
Для выделения биологически- активного белка из сыворотки крови больных шизофренией были использованы классические методы аналитической химий белка: ионообменная хроматография на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой, препаративный и аналитический электрофорез.
Для ионообменной хроматографии использовалась порошкообразная ДЭАЭ-целлюлоза ДЭ-32 фирмы "Peaнал" (ВНР). Подготовленной к работе целлюлозой заполняли колонку, размером I х 60 см.
Хроматография проводилась по методу Т.Дэвени и Я.Гергей (1976). Полученные 4 белковые фракции больных шизофренией, другими психозами и здоровых лиц были исследованы на наличие биологической активности. Было выявлено, что только  III белковая фракция сыворотки крови больных шизофренией обладала мембрано-активными свойствами, проявляющимися в способности увеличивать удельную проводимость искусственных бислойных липидных мембран (БЛМ).
Изучение гомогенности биологически активной 3 белковой фракции, содержащей в основном α -глобулины, больных шизофренией и неактивной у больных другими психозами и здоровых яиц при помощи аналитического электрофореза в полиакриламидном геле показало, что эта фракция является смесью разнородных белков.
Дальнейшая очистка Ш белковой фракции проводилась при помощи препаративного диск-электрофореза у 86 больных шизофренией, 6 больных другими психозами и 21 здорового. В результате был выделен гомогенный белок, сохранявший мембраноактивные свойства у больных шизофренией.
Как известно, гомогенность изучаемого материального-субстрата является самым первым и необходимым условием для изучения его структуры. В связи с этим, гомогенности полученного белка придавалось особое значение. Гомогенность мембраноактивного белка проверялась тремя параллельными способами: анали-. тическим электрофорезом в полиакриламидном геле, определением свободного NH2 -конца в молекуле белка и количеством линий преципитации при двойной двумерной диффузии в агаровом геле по Ухтерлони, после получения иммунной сыворотки у кроликов.
Исследования показали, что полученный после препаративного диск-электрофореза белок, мембраноактивный у больных шизофренией и неактивный у больных другими психозами и здоровых лиц, является гомогенным. По своей электрофоретической подвижности указанный белок относится к группе α2-глобулина.  
Выбор и использование тест-системы для выявления мембраноактивных свойств сывороточного белка больных шизофренией.
В отечественной и зарубежной литературе описано много способов обнаружения биологической активности сывороточных белков больных шизофренией. Так, биологическую активность "фактора плазмы" некоторые исследователи выявили по снижению скорости взбегания обученных крыс но отвесной веревке, возникновению психических расстройств у здоровых добровольцев, гемолизу куриных эритроцитов и связанных с ним увеличением  коэффициента лактат/пируват.
Работами отечественных исследователей было выявлено, что в основе упомянутых многоплановых эффектов лежит способность сывороточных белков больных шизофренией повреждать, прежде всего мембраны клеточных и субклеточных структур.
Не умаляя достоинств каждого метода исследований, следует все же сказать,_ что некоторые из них отличались недостаточной информативностью, трудностью дифференциации и проведения корреляции полученных результатов с различными клиническими проявлениями и течением шизофренического процесса..
Кроме того, результаты исследований некоторыми указанными методами вызывали определенные трудности в цифровых выражениях, способных максимально объективизировать верификацию шизофрении.
Все изложенное послужило причиной поиска новых, современных методов выявления биологической активности сыворотки крови больных шизофренией. В своем поиске такого метода, мы руководствовались доказанной способностью сывороточных белков больных шизофренией повреждать клеточные мембраны.
Р.Мюллер с соавторами (1963) впервые выявили, что липиды, спонтанно образующие ламеллярные слои, способны формировать бислойные структуры на небольших отверстиях в тонких гидрофобных материалах. Авторы с помощью простой электроизмерительной техники охарактеризовали важнейшие электрические параметры этих мембран, получивших название бислойных липидных мембран - БЛМ. Было обнаружено, что по своим электрическим характеристикам и ряду других физико-химических свойств, БЛМ близки к биологическим мембранам.
В психиатрической литературе каких-либо указаний на использование этого метода для выявления биологической активности сывороточных белков больных шизофренией обнаружено не было.
В специальной литературе имеются сообщения о многих биологически активных соединениях, вызывающих изменение проводимости БЛМ. При сопоставлении результатов исследования мембраноактивных свойств Ш белковой фракций сыворотки крови больных  шизофренией и данными литературы по изучению биологически активных соединений методом БЛМ, можно видеть, что в обоих случаях отмечается изменение проводимости БЛМ.
 

Таблица 2
Сравнительная характеристика увеличения проводимости БЛМ при воздействии мембраноактивных веществ и Ш белковой фракции сыворотки крови больных шизофренией

 

Вещество	Концентрация  (М)	Удельная проводимость (q)БЛМ: ом--1 см -2
Контроль (Ш белковая фракция сыво­ротки крови здоровых лиц)	1,0•10 -5	2,34•10 -10
ЦТАБ (цетилтриметиламмония бромид)	1,0•10 -5	(1,4±0,2)•10 -6
АНС (1-анилино-8-нафта-линсульфонат)	3,0•10 -5	(5,4±0,5)•10 -7
ЛК (линолевая кислота) в н-декак	4,2•10 -1	(1,0±0,3)•10 -7
Яд паука Steatoda Paykulliana	1,0•10 -5	(5,0±0,3)•10 -5
Грамицидин А	4,0•10 -6	(1,8±0,5)•10 -5
Аламетицин	4,0•10 -6	(3,2±0,3)•10 -4
Ш белковая фракция сыво­ротки крови больных шизофренией	1,0•10 -5	(1,7±0,3)•10 -9

Как видно из приведенных данных, Ш белковая фракция сыворотки крови больных шизофренией обладает такими же мембраноактивными свойствами, что и известные биологически активные соединения. Это и послужило причиной окончательного выбора метода бислойных липидных мембран в качестве тест - объекта для выявления мембранотропной активности сыворотки крови больных шизофренией.
Результаты собственных исследований и клинико-биологические корреляции.
Для изучения мембраноактивных свойств 3 белковой фракции и гомогенного α2 -глобулина сыворотки крови больных шизофренией использовались БЛМ, полученные по методу Р.Мюллера с соавторами (1963). Для измерения электропроводимости БЛМ применялась электрическая схема, описанная Е.А.Либерманом (1970).
В среде, содержащей 100 мМ KCL и 5 мМ TPИС-HCL ,pH 7,5, проводимость БЛМ без сывороточных белков составляла 1-2,34•10-10ом-1см-2.
Во всех случаях после добавления в среду 2,0 мл концентрированной на роторном испарителе Ш белковой фракции больных шизофренией наблюдалось увеличение удельной проводимости БЛМ почти на I порядок ( 4,6±0,5•10-9ом-1см-2). Аналогичные изменения проводимости БЛМ, индуцированной Ш белковой фракцией больных шизофренией, наблюдались и в присутствии в среде ионов натрия.
Результаты исследования мембраноактивных свойств Ш белковой фракции больных шизофренией в зависимости от типа течения и клинических проявлений представлена в таблице 3.

Тип течения и клинические проявления 

Тип течения и клинические проявления	Кол-во Удельная проводимость больных БЛМ (Qср) q0=2,34•10ом -1 cм -2
1.Непрерывно-прогредиентный:	75	5,0±0,5•10-9ом-1см-2P<0,001
1.Вялотекущая:	17
-неврозоподобная	5	б,7±0, 3• 10-9ом-1см-2P<0,001
-паранойяльная	12	6,0±0,6•10-9ом-1см-2P<0,001
2.Умеренно-прогредиентная:	41
-галлюцинаторно-параноидная (галлюцинаторный вариант)	23	3,5±0,4• 10-9ом-1см-2P<0,001

1		2	3
	галлюцинаторно- параноидная (бредовой вариант)	18	5,1±0,4• 10-9ом-1см-2P<0,001
	3. Злокачественная (гебефреническая)	8	3,7±0,4•10-9ом-1см-2P<0,001
	4. Исходные состояния (гебефреническая и параноидная)	9	1,6+0,2•10-9ом-1см-2P<0,001
II.	Приступообразно-прогре-диентпый (шубообразный) - параноидная	19	5,6±0,5•10-9ом-1см-2P<0,001
III	Приступообразный (рекурентный): - кататоно-онейроидная	10	3,8±0,6• 10-9ом-1см-2P<0,001

Как видно из таблицы, мембраноактивные свойства Ш белковой фракции сыворотки крови больных шизофренией оказались величиной динамичной, зависящей как от типа течения шизофрении, так и от клинических проявлений.
Кроме того, из таблицы видно, что у больных шизофренией в целом установлено достоверное увеличение удельной проводимости БЛМ при воздействии на нее Ш белковой фракции по уравнению с контрольной группой (Р<0,001), подтвержденное при применении двой-ного слепого метода контроля.
Рассмотрение полученных результатов в зависимости от типа течения шизофренического процесса показало, что наиболее выраженные мбраноактивные свойства Ш белковой фракции наблюдались у больных непрерывно-прогредиентной и периодической (рекуррентной) шизофренией, стабильно увеличивающей удельную проводимость БЛМ почти на 1 порядок, то-есть в 10 раз (5,0 ±
 
±0,5•10-9ОМ-1 СМ-2 и 3,8±0,6•10-9ОМ-1 СМ-2  соответственно Р< 0,001). Промежуточное положение между указанными показателями и данными контрольной группы занимали величины увеличения удельной проводимости БЛМ при воздействии на нее Ш белковой фракции сыворотки крови больных приступообрано-прогредиентным (шубообразным) типом течения (5,6±0,5•10-9ОМ-1 СМ-2, Р<0,001).
В рамках непрерывно-прогредиентного типа течения шизофренического процесса наиболее высокие значения увеличения удельной проводимости БЛМ отмечались у больных гебефренической формой: 3,7±0,5•10-9ОМ-1 СМ-2  (Р<0,001).
Такими же выраженными оказались и величины увеличения  удельной проводимости БЛМ у больных с галлюцинаторно-параноидными расстройствами, протекающими с синдромом вербального галлюциноза (галлюцинаторный вариант): 3,6±0,4•10-9ОМ-1 СМ-2  (Р< 0,001).
Несколько ниже оказалась способность увеличивать удельную проводимость БЛМ Ш белковой фракции сыворотки крови больных шизофренией, протекающей с неврозоподобными и паранойяльными расстройствами в рамках вялотекущей и галлюцинаторно -параноидными (бредовой тип) нарушениями (6,7±0,3•10-9ОМ-1 СМ-2,  6,0±0,6•10-9ОМ-1 СМ-2 И 5,I±0,4•10-9ОМ-1 СМ-2 Р<0,001). Эти данные показывают, что при усложнении клинически картины, то есть углублении уровня психотических расстройств, мембраноактивные свойства сыворотки крови также увеличиваются.
В то жe время, у больных со сформированным дефектом психической деятельности (исходные, конечные состояния) показатель удельной проводимости - БЛМ приближался к показателю контрольной группы.
 
Таким образом, проведенные исследования на БЛМ выявили наличие в крови больных шизофренией биологически активного сывороточного фактора, воздействующего на мембрану и вызывающего увеличение ее удельной проводимости, выраженность которого зависит от степени тяжести заболевания, имея в виду особенность течения и уровень психопатологических расстройств, характерных для активного периода заболевания.
Исследования мембраноактивных свойств очищенного α2 - глобулина показали, что способностью увеличивать удельную проводимость БЛМ обладало только гомогенное белковое вещество - α2 - глобулин, выделенное из Ш белковой фракции сыворотки крови больны шизофренией. В то же время, аналогичный α2 - глобулин сыворотки крови больных другими психозами и здоровых лиц, как и до гомогенизации, способностью влиять на удельную про-водимость БЛМ не обладал.
Результаты исследований мембраноактивных свойств гомогенного белка (α2-глобулина) больных шизофренией приведены в таблице 4.

Мембраноактивные свойства сывороточного α2-глобулина больных шизофренией

Тип течения и клинические проявления	Кол-во больных	Удельная проводмость БЛМ (qср) (q0)= 2,34 •1010ом-1см-2
1.Непрерывно-прогредиентный	57	2,7±0,4•109ом-1см-2 Р<0,001
I.Вялотекущая	11
- неврозоподобная	4	4,2±0,3•109ом-1см-2 Р<0,001
паранойяльная	7	3,7±0,6•109ом-1см-2 Р<0,001
2.Умеренно-прогредиентная	33

- параноидная (галлюци­наторный вариант)	21	1,3±0,2•10-9ом-1 см-2   Р<0,001
- параноидная (бредовой вариант)	12	2,6±0,4•10-9ом-1 см-2  Р<0,001
З.Злокачественная:
- гебефреническая	7	1,7±0,3•10-9ом-1 см-2  Р<0,001
Исходные (конечные) состояния	6	1,1±0,3•10-9ом-1 см-2  Р<0,001
2.Приступообразно-прогредиентный (шубообрааный)	10 10	2,9±0,5•10-9ом-1 см-2  Р<0,001
3.Периодический (рекуррен­тный)	5
1.Кататоно-онейроидная	5	1,2±0,5•10-9ом-1 см-2  Р<0,001

Из таблицы видно, что после очистки Ш белковой фракции сыворотки крови больных шизофренией при помощи препаративного электрофореза и получения гомогенного α2-глобулина, последний обладал более выраженной способностью увеличивать удельную проводимость БЛМ: 2,7-±0,6 •10-9ОМ-1 СМ-2  против 5,0±0, •10-9ОМ-1 СМ-2   до очистки, то есть удельная проводимость БЛМ возросла почти на 50%.
Кроме того, можно видеть, что наиболее выражена способность увеличивать удельную проводимость БЛМ у α2-глобулина больных с параноидными (галлюцинаторный вариант) и гебефрени-ческими расстройствами при непрерывно-прогредиентном течении шизофренического процесса, параноидными нарушениями в рамках шубообразной шизофрении и больных с кататоно-онейроидными проявлениями рекуррентной шизофрении.
При сопоставлении результатов исследований мембраноактивных свойств α2 – глобулина на БЛМ в зависимости от характера течения шизофренического процесса можно видеть, что наиболее выражена величина удельной проводимости БЛМ при воздействии α2-глобулина больных с периодическим течением шизофрении: 1,2±0,5•10-9ом-1см-2. Несколько ниже эти показатели в случае непрерывно-прогредиентного течения (2,7±0,4•10-9ом-1см-2 )  и сравнительно меньше величина удельной проводимости БЛМ  у больных с шубообразным течением - 2,9±0,5•10-9ом-1см-2 .
Полученные результаты, как и прежде, указывают на увеличение способности изменять проводимость БЛМ в зависимости от уровня психотических расстройств. Так, значения увеличения удельной проводимости БЛМ при воздействии на нее  α2-глобулина больных вялотекущей шизофренией заметно нике, чем больных с параноидными и гебефреническими проявлениями.
При исходных срстояниях действие α2-глобулина на удельную проводимость БЛМ почти не проявляется и приравнивается к нормальным величинам.
Таким образом, в результате излокенных выше методов исследования из сыворотки крови больных шизофренией} больных другими психозами и практически здоровых людей был выделен гомогенный белок, представляющий собой α2-глобулин» обладавший у больных шизофренией биологической активностью.
Характеристика мембраноактивного белка сыворотки крови больных шизофренией.
Серия исследований физико-химических особенностей гомогенного α2 -глобулина включала в себя изучение влияния температуры на мембраноактивные свойства,  определение молекулярной массы и аминокислотного состава, а такке его влияние на ионную проницаемость   БЛМ.
Изучение мембраноактивных свойств α2-глобулина проводилось при воздействиях температуры в 40°С, 50°С, 60°С, 70°С и
100°С. После нагревания в течение 30 минут до необходимой температуры белковый раствор тут же охлаждался под проточной водой и добавлялся в среду со сформированной БЛМ.   
Результаты исследования влияния температуры на мембраноактивные свойства α2-глобулина приведены в таблице 5.

                Таблица 5

№ про­бирки	Содержа-ние глобулина _(мг/мл) _	Исходная удель­ная проводимость БЛМ ом-1см-2	Значение темпера­туры	Удельная прово­димость БЛМ ом-1см-2
1.	10 мг/мл.	2, 1•10-9	40°С	2, 0•10-9
2.	_"_	2, 1•10-9	50°С	2, 0•10-9
3.	_"_	2, 1•10-9	60°С	2,34•10-10
4.	_"_	2, 1•10-9	70°С	2,34•10-10
5.	_"_	2, 1•10-9	100 °С.	2,34•10-10

Как видно из   таблицы, при нагревании мембраноактивного α2-глобулина до 40°С и 50°С удельная проводимость БЛМ несколько увеличивалась по сравнению с исходной, а при нагревании до 60°С и выше, вплоть до кипячения, мембраноактивные  свойства α2-глобулина исчезали.
Помимо этого, нами было исследовано влияние низкой температуры на биологическую активность α2-гдобулина больных шизофренией. Для   этого, после получения очищенного белка часть белковогo раствора концентрировали на роторном испари-
 
теле и убеждались в наличии способности этого белка увеличивать проводимость БЛМ. Другую часть белкового раствора "высушивали" методом лиофилизации жидким азотом. Высушенный белок растворяли затем в 1,0 мл дистиллированной воды и определяли наличие или отсутствие мембранной активности. Результаты показали, что, как и в случае кипячения, присутствовавшая ранее способность белка увеличивать удельную проводимость БЛМ, после замораживания также исчезала.
Определение молекулярной массы мембраноактивного α2-глобулина проводилось методом гель-электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия.
В качестве белков-маркеров с известными молекулярными
массами были использованы:                                                                      

Таблица 6

   

№/п Наименование белка   Молекулярная масса  Страна-изготовитель
1.   Цитохром                        11000           "Servo"	США
2.   Лизоцим                          14400          "Renal"	ВНР
3.    Папаин                             20700           "Loba Chemie"	Австрия
4.   Трипсин                            24000           "Спофа"	ЧССР
5.    Карбоксипептидаза         34000           "Renal"	ВНР
6.    Ов-альбумин                  43000           "Renal"	ВНР
7.   Альбумин                         68000            "Renal"	ВНР
8.   Глюкозооксидаза            153000          "Реохим"	СССР
9.    Пируваткиназа                 237000             "Renal"	ВНР

Концентрация белков составляла 0,5 мг на 1,0 мл.
Электрофорез проводили при постоянном токе из    расчета по
8 мА на гель. Вычисление подвижности белка осуществлялось сле-
дующим образом:   
 

 

1	2
Серии	43
Глютаминовая кислота	156
Пролин	43
Глицин	28
Алании	115
Цистеинх)	5
Валин	73
Метионйн	8
Изолейцин	13
Лейцин	112
Тирозин	30
Фенилаланин	159
Гистйдин	29
Лизин	98
Аргенин	47

Примечание: х) - примерная величина. Без учета триптофана.
Изучение ионной проницаемости БЛМ, модифицированных мемб-раноактивным α2-глобулином больных шизофренией, проводилось путем, создания на БЛМ 10-кратного градиента (1 мМ : 10 мМ) по Na+ и К+ наблюдалась генерация потенциала, величиной 35±2 мВ и 43±3 мВ соответственно. Знак мембранной разности потенциалов, "минус" был со стороны раствора с более высокой концентрацией электролита. Число переноса катионов, рассчитанное на основе измерения потенциалов, возникающих на БЛМ при 10-кратном градиенте по указанным ионам, равнялось 0,80 и 0,87. Величина и знак потенциала указывают на то, что БЛМ, модифици-
 

рование α2-глобулином сыворотки крови больных шизофренией, обладают преимущественно катионной избирательностью.
Для более тщательного анализа селективности БЛМ, модифициро-ванных α2-глобулина больных шизофренией, были измерены бионные потенциалы для одновалентных катионов, когда по обе стороны oт мембраны находились концентрации солей (10 мМ) разных ИОНОВ: калия, натрия и лития.
Для расчета ионной специфичности БЛМ использовалось уравнение, предложенное  G. Eisenman(220) :

       RT                 a _j ¹ + P_i / P_j • a _j ¹

Υ_M              = ln

        F                   a _j ⁿ + P_i / P_j • a _j ⁿ

 

Из таблицы видно, что относительные коэффициенты проницаемости БЛМ (Pi / Pj ) для исследованных катионов имеют следующий ряд: K>Na>Li , то есть наиболее выравено увеличение удельной проводимости БЛМ при наличии в омывающей среде ионов калия и α2-глобулина больных шизофренией.
Таким образом, проведенные исследования, направленные на выявление различий в электрофоретической подвижности, молекулярном весе, аминокислотном составе мембраноактивного α2-глобулина больных шизофренией и неактивного о^-глобулина больных другими психозами и здоровых лиц, не увенчались успехом, о чем Мокно судить по приводимой таблице 9.
 

 
где: - и ΥM  - измеряемый мембранный потенциал, a j и a j -активность иоаов, i,j-cотороны БЛМ, R - газовая постоянная, Т.- абсолютная темпера-тура, J - число Фарадея, Pi/Pj- относительные коэффициенты прони -цаемости.
В исследованиях экспериментально создавались условия, когда одна соль, например 10 мМ хлорида натрия, находится по одну сторону БЛМ, а другая соль, например 10 мМ хлорида калия - по другую    сторону мембраны. Принимается, что коэффициент избирательности в этих условиях равен отношению коэффициентов проницаемости.
Результаты изучения биионных потенциалов (Υб) и относительных коэффициентов проницаемости (Pi/P j) БЛМ для одновалентных катионов в присутствии α2-глобулина больных шизофренией приведены
в таблице 8.

Таблица 8

ионы                Величины биионных потен-   Величины относительного

циалов (V_б), мВ                       коэффициента проницае-

мости (Pi/Pj)

к                                                 0                                                  1

Na                                         30±I,8                                            0,31

U                                          47±0,5                                            0,15

 

       
1.    Молекулярная масса    одинаковая   
2.    Аминокислотный состав    с х о ж и й   
3.    N-концевая ами-нокислота         идентичная   
4.    Электрофоретическая  подвижность     одинаковая   
5.    Биологическая ак-тивность на БЛМ    2,34±0,4•10-9ом-1см-2        отсутствует
Как видно из таблицы, дать конкретное объяснение наличию биологической активности у белка больных шизофренией и отсутствию активности у белка здоровых людей и больных другими психическими заболеваниями на данном этапе работы не представлялось возможным.
 

 

 
Белковый состав α2-глобулина.
В ряде случаев для концентрирования белковых растворов на последнем этапе очистки (после препаративного диск-электрофореза) вместо роторного испарителя в работе были использованы мембранные концентраторы отечественного производства ФМ-2 с молекулярными фильтрами "Владипор" различной разрешающей способности. При концентрировании белкового раствора, полученного после препаративного диск-электрофореза, с помощью молекулярного фильтра с порогом разделения по молекулярной массе 30000 Да происходило разделение высокомолекулярного α2-глобулина на два компонента - высокомолекулярный и низкомолекулярный, проникающий через молекулярный фильтр. При количественном определении белка модифицированным методом Лоури было обнаружено, что высокомолекулярный компонент составлял 80%, низкомолекулярный же - 20% общего исходного количества  α2-глобулина. Результаты исследования сыворотки крови 17 больных шизофренией и 6 здоровых лиц показали, что мембраноактивным свойством обладал низкомолекулярный компонент α2-глобулина больных шизофренией. Было также выявлено, что мембраноактивные свойства α2- глобулина усиливались после каждого этапа его выделения и очистки. Если Ш глобулиновая фракция, увеличивала удельную проводимость БЛМ почти на 1 порядок, то гомогенный α2-глобулин увеличивал проводимость БЛМ уже на 1 порядок, а низкомолекулярный компонент сывороточного α2-глобулина на 1,5 - 2 порядка.
В контрольной группе лиц при концентрировании α2-глобулина при помощи молекулярных фильтров также получали два белковых компонента - высокомолекулярный и низкомолекулярный, не влияющий на проводимость БЛМ.
 
Таким образом, впервые был получен низкомолекулярный белковый компонент сыворотки крови больных шизофренией, наличие которого лишь предполагали исследователи биологических проблем шизофрении.
Изучение физико-химических особенностей мембраноактивного низкомолекулярного компонента заключалось в определении молекулярной массы, аминокислотного состава и спектров кругового дихроизма (КД).
Определение молекулярной массы проводилось методом колоночной гель-фильтраций с использованием ультрагеля АсА-34 (Швеция). Колонку калибровали пропусканием через нее белков-маркеров с известными молекулярными массами и построением графика значения логарифмов молекулярной массы белков против их элюционных объемов.
Измерение объема элюции исследуемого низкомолекулярногс белка показало, что он равняется 106-107 мл. При сопоставлении графика значения логарифмов молекулярной массы белков -маркеров против элюционных объемов с построенным графиком исследуемого белка было выявлено, что его молекулярная масса приблизительно равна молекулярной массе трипсина (Υв2 = 106 мл), то есть около 24000 Да. Какой-либо разницы молекулярной массы мембранотропного низкомолекулярного компонента больных шизоф-ренией и неактивного аналогичного компонента больных другими психозами и здоровых лиц нами выявлено не было.
Аминокислотный состав изучаемого низкомолекулярного компонента сывороточного α2-глобулина больных шизофренией и здоровых лиц определяли после кислотного гидролиза 6 Н соляной кислотой в течение 24 часов.
Изучение аминокислотного состава исследуемого ниэкомо-
 
 

лекулярного компонента проводилось на аминокислотном анализаторе фирмы "Бекман" (США). Исследованию подвергались низкомолекулярные компоненты α2-глобулина больных шизофренией (5 случаев) и здоровых лиц (3 случая). Двукратное исследование каждого образца позволило определить следующий аминокислотный состав.

Таблица 10
Наименование аминокислоты Молей аминокислоты/моль белка
 

Аспарагиновая кислота	17
Трионин	10
Серии	10
Глютаминовая кислота	20
Пролин	10
Глицин	14
Алании	18
Валин	10
Метионин	4
Изолейцин	7
Лейцин	13
Тирозин	8
Фенилаланин	6
Гистидин	5
Лизин	8
Аргенин	6

Примечание:     
1.Триптофан и цистеин не определялись из-за полного разрушения при гидролизе.
2.Общее количество аминокислотных остатков около 1,6
3. Средний молекулярный вес аминокислотного остатка - 144,5 Да.
 
Сравнительное изучение аминокислотного состава низкомо-лекуляоной части, активной у больных шизофренией и неактивной у здоровых лиц, какой-либо разницы между ними не выявило.
Таким образом, ни определение молекулярной массы, ни изучение вторичной структуры низкомолекулярного компонента не
объяснили причины биологической активности этого компонента у
больных шизофренией.   
В связи с этим в работе было использовано изучение иссле-дуемого низкомолекулярного белка с помощью КД-спектроскопии.
КД-спектроскопия низкомолекулярного компонента сывороточного α2- глобулина
Были сняты спектры кругового дихроизма (КД) в пептидной (от 200 до 250 нм) области спектра для низкомолекулярной фракции белка, выделенного из сыворотки крови больных шизофренией и здоровых лиц. Исследуемые низкомолекулярные белки находились в 0,005 М натрий-фосфатном буферном растворе (рН 7,5). Коли-чественное содержание белка в растворе определяли по модифи-цированному методу Лоури. Спектры КД снимали на спектрополя-риметре Jasco J - 20 (Япония). Измерения проводили при концентрации белка порядка 0,5 - 1,0 мг/мл, в кюветах длиной 0,02, 0,005 см, при этом чувствительность прибора была 0,002° на I см, постоянная времени   прибора - 64 сек. Полученные   : данные выражались в виде молярной эллиптичности в расчете на средний аминокислотный остаток (θ). Средняя молекулярная масса аминокислотного остатка рассчитывалась из аминокислотного состава низкомолекулярного компонента белка и была равна 144 Да.
: Исследования показали,  что спектр КД низкомолекулярного
 

компонента сывороточного α2-глобулина здорового человека ха-рактеризуется отрицательными минимумами эффекта Коттона (ЭК) при λ = 217 нм   и   λ = 207 нм с величинами молярной эллип-тичности   [θ]    соответственно [θ] 217   =  - 9300 град•см  дмоль -1 и [θ] 217 = - 9500 град•см2дмоль-1. Однако спектр КД низкомолекулярного компонента сывороточного α2-глобулина больных шизофренией обладающего мембраноактивным свойством характеризуется одним минимумом ЭК при λ = 207 HМ с величиной молярной эллиптичности [θ] 207    = 1700 град•см2дмоль-1.
Сравнение спектров КД кривых А и Б в области поглощения пептидных хромофоров показывает, что ни в области п→ПА   пере-хода пептидной группы (215-240 нм) и ни в области п→ПА   пере-хода пептидной группы (λ<215 нм) молярные эллиптичности  [θ]     для этих кривых не совпадают. Это свидетельствует о том, что в низкомолекулярном компоненте сывороточного α2-глобулина больных шизофренией происходят существенные конфирмационные переотройки и наблюдается ярко выракенное изменение вторичной структуры этого компонента.
Результаты изучения физико-химических свойств низкомоле-кулярного компонента больных шизофренией,  обладающего биоло-гической активностью и аналогичного компонента здоровых лиц отражены в таблице 11.
Таблица 11.

Свойства                                       Низкомолекулярный                  Низкомолекулярный

                                                        компонент больных                    компонет здоровых

                                                        шизофренией                                лиц

                                                        

1.Молекулярная масса

   (Да)                                           одинаковая

2.Аминокислотный

состав                                     одинаковый

I		2                                     3
З.Электрофоретичес-кая подвижность		идентичная
4.Биологическая ак­тивность на ЬЛМ	1,7±0,5•10-9ом-1см-2            отсутствует
5.Эллиптичность [θ] 207	-1700	град• см2 дмоль-1    - 9500 град•см2 дмоль-1

Как видно из таблицы, отличающиеся свойства низкомолекулярного компонента α2-глобулина больных шизофренией от аналогичного у здоровых лиц заключаются в наличии мембранной активности и выраженных конформационных изменений. Было логично связать два этих процесса друг с другом - конформационные сдвиги структуры белка приводят к появлению новых функций -мембраноантивных. Для более убедительного обоснования этой гипотезы нами было исследовано влияние фактора времени и лечения на мембраноактивные свойства низкомолекулярного компонента α2-глобулина сыворотки крови больных шизофренией и на спектры КД.
  Для Изучения влияния фактора времени на мембраноактивные овойства низкомолекулярного компонента α2-глобулина больных шизофренией и на спектры КД производили поэтапную очистку мембраноактивного белка вышеизложенными методами и получали низкомолекулярный компонент, обладающий способностью увеличивать удельную проводимость БЛМ.
Затем в полученном низкомолекулярном компоненте определяли содержание белка по модифицированному методу Лоури. Содержание белка составляло в среднем 4 мг/мл. Полученный белковый раствор разливали в 10 пробирок из расчёта по 0,5мг/мл
 
в каждой. Белковый раствор хранили при температуре +4°С. Ежедневно исследовали содержимое 1 пробирки на величину удельной проводимости БЛМ и характер спектра КД.
Результаты исследования приводятся в таблице 12.

        Таблица    12

№ пробирки (день), содержание белка 0,5 мг/мл	Удельная проводимость БЛМ (qср<)ом-1см -2	Эллиптичность [θ] 207   град•см2дмоль-1
1	1,2 •  10-9	-1700
2	1,7 •10-9	-1900
3	2,6 •10-9	-2300
4	4,6 •10-9	-3100
5	5,7 •  10-9	-3900
6	6,6• 10-9	-5000
7	7,1• 10-9	-5900
8	7,9 • 10-9	-6500
9	8,8 •  10-9	-7800
10	1,0 •  10-10	-9400

Из таблицы видно, что с течением времени происходит спонтанное снижение способности низкомолекулярного компонента увеличивать удельную проводимость БЛМ с одновременным возвратом молярной эллиптичности к нормальным величинам.
Изучение влияния температуры на мембраноактивные свойства и спектры КД низкомолекулярного компонента сывороточного α2-глобулина имеет особое значение в связи с тем, что при термической обработке биологически активных веществ белковой природы при температуре 50-60°С происходит конформационный переход, следствием чего, является инактивация этих
 
веществ.
Действующий механизм тепловой денатурации состоит в том, что пои повышении температуры атомы и атомные группы в молекуле белка увеличивают скорость колебания, так что в конце концов в отдельных местах нарушаются связи. В первую очередь наруааются водородные,- а также гидрофобные связи.
Для изучения мембраноактивных свойств и спектров-КД низ-комолекулярного компонента при различных значениях температуры из сыворотки крови больных шизофренией выделяли низкомолекулярный компонент α2-глобулина методами, описанными выше. Содержание низкомолекулярного компонента в 1 мл составляло  4 мг. Белковый раствор разливали в 6 пробирок из расчета по 1,6 мг/мл в каждой пробирке. Термическую обработку белкового раствора производили при температурах 30°, 40°, 50°, 60°, 70° и 100°С. После нагревания при соответствующей температуре в течение 30 минут белковый раствор остужали в проточной воде. Часть белкового раствора добавляли в среду со сформированной БЛМ для определения мембранной активности. Другая часть низкомолекулярного компонента, термически обработанная и остуженная, исследовалась на спектрополяриметре.
Результаты исследования представлены в таблице 13.
           

№ про­бирки	Значения темпера-	Удельная проводимость БЛМ (qср)ом-1см-2	Молярная эллиптич­ность [θ] 207   град•см2дмоль-1
1	30°С	8.1•10-9	-1580
2	40°С	1.2•10-9	-2800
3	50°С	8,4 •  10-9	-4900

1	2	3	4
4	60°C	2,34 • 10-10	-6400
5	70°C	2,34 •  10-10	0
6	100 °С	2,34 •  10-10	0

Из таблицы видно, что температурное воздействие на низкомолекулярный компонент оказывает влияние как на мембраноактивные свойства, так и на молекулярную эллиптичность. Температурное воздействие на исследуемый белок в 30°С практически не влияет ни на удельную проводимость БЛМ, модифицированную низкомолекулярным компонентом, ни на кривизну молярной эллиптичности.
  При нагревании низкомолекулярного компонента до 40°С происходит заметное снижение величины удельной проводимости БЛМ
и увеличение крутизны молярной эллиптичности. При температуре
50°С мембраноактивные свойства низкомолекулярного компонента
заметно ослабевают и приближаются к нижним границам нормы.
Спектр КД низкомолекулярного компонента  при 50°С также напоминает спектр КД здорового человека. При воздействии на исследуемый белок температуры в 60°С наблюдается полная инактива -
ция, но спектр КД прописывается в виде нормы.    .
При температурах 70°С и 100°С мембраноактивные свойства низкомолекулярного компонента полностью исчезают, спектры КД не обнаруживают наличие белка.
Изучение динамики мембраноактивных свойств и спектра КД низкомолекулярного компонента больных шизофренией до и после лечения доводили непосредственно при поступлении больного в стационар, до начала лечения и по достижении клинической ремиссии, вне зависимости от проведенного лечения.
Ниже приводятся результаты этих исследований.

        Таблица № 14

Дата иссле­дования	Удельная, проводимость     БМЛ (qср)ом-1см-2	Молярная эллиптич­ность [θ] 207               Молярная
Психотическая стадия   Стадия ремис­сии	8,4•10-10ом-1см-2 1,5•10-10ом-1см-2	-1690 град•см2 дмоль-1           -6400 град•см2 дмоль-1

Как видно из таблицы, значения удельной проводимости БЛМ и молярной эллиптичности низкомолекулярного компонента α2- глобулина  больных шизофренией являются величиной динамичной, изменяющейся. Так,например, при наличии острой психотической симптоматики, величина удельной проводимости БЛМ и молярной эллип-тичности низкомолекулярного компонента указывает на наличие мембраноактивных свойств этого компонента и выраженные сдвиги в его структуре. Наряду с этим, при затухании психотической симптоматики и становлении ремиссии показатели удельной проводимости БЛМ и молярной эллиптичности приближаются к нормальным   величинам, но не достигают таковых у здоровых людей.
Таким образом, изучение динамики удельной проводимости БЛМ и характер спектров КД в процессе "старения" низкомолекулярного компонента больных шизофренией, термической обработки  и в процессе становления ремиссии, позволило заключить, что эти два феномена взаимосвязаны друг с другом - при возрастании молярной эллиптичности удельная проводимость БЛМ снижается и наоборот - выраженные конформационные сдвиги низкомолекулярного компонента приводят к появлению мембраноактивных свойств.
 

 
выводы
1.    Сыворотка крови больных шизофренией содержит биологически активный белок, вызывающий увеличение удельной проводимости искусственных бислойных липидных мембран (БЛМ) в 10 и более раз.
2.    Использованный впервые в психиатрии, метод измерения удельной проводимости БЖ, является надежной тест-системой для выявления биологически активного фактора сыворотки крови больных шизофренией.
3.    Мембраноактивный сывороточный белок больных шизофренией относится к группе α2- глобулинов.
4.    Мембраноактивные свойства α2-глобулинов коррелируют с клиническими проявлениями шизофрении. При усложнении клинической картины и углублении уровня психотических расстройств.-мембраноактивные свойства сывороточного α2- глобулина увеличи-ваются.
При сформировавшемся шизофреническом конечном состоянии мембраноактивные свойства сывороточного α2-глобулина исчезают.
5.    Мембраноактивные свойства сывороточного α2-глобулина
коррелируют с типом течения шизофренического процесса. Наиболее высокие значения мембранной активности сывороточного α2-гло-
булина отмечаются при приступообразном (рекуррентном) течении
шизофрении. Менее высоки эти величины при непрерывно-прогредиент-
ном течении и наименее выранены - при шубообразном течении заболевания.
6.    В стадии установившейся клинической ремиссии мембраноактивные свойства сывороточного α2-глобулина больных шизофренией исчезают.
7.    Мембраноактивный сывороточный представляет собой термолабильную двухкомпонентную систему, состоящую из высокомолекулярного и низкомолекулярного компонента.
Носителем мембранной активности сывороточного α2- глобулина  является низкомолекулярный компонент.
8.    Характеристика физико-химических свойств  глобу-
лина и низкомолекулярного его компонента сыворотки крови,
включающая определения:
-    электрофоретической подлинности;
-    молекулярной массы;
-    аминокислотного состава;
-    термолабильности;
- особенности конформации,
выявила, что во вторичной структуре низкомолекулярного компонента больных шизофренией происходят ярко выраженные информационные сдвиги, приводящие к появлению мембраноактивных свойств.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.
1.    Ташматов Б.А., Усманов П.Б., Халилов М.Х. Действие
сыворотки крови больных шизофренией на бимолекулярную фосфо-
липидную мембрану. // У1 Всесоюзн.съезд невропатологов и психиатров:  Тез.докл. (16-20 декабря 1975 г.)М. - М., 1975. -
Т. 3.-0.129 -130.
2.    Ташматов Б.А. Сывороточный фактор при шизофрении (обзор литературы). //Клиническая психиатрия Узбекистана. - Ташкент, 1979. - С.42 - 46.
3.    Ташматов Б.А. Значение биологических методов исследо-вания патогенеза шизофрении. // Клиническая психиатрия Узбекис-тана. -Ташкент, 1981. - С.  37-41.
4.    Ташматов Б.А. Сывороточный фактор при шизофрении (обзор литературы). /Клиническая психиатрия Узбекистана. - Ташкент, 1979. - С. 42-46.
5.    Ташматов Б.А. Неразрешенные вопросы сывороточного фак-тора при шизофрении. // 2 съезд невропатологов и психиатров Узбекистана: Тезисы докладов (18-19 ноября 1987 г.) Ташкент.
-    Ташкент: Медицина, 1987. - С. 122-124.
6.    Характеристика сывороточного фактора при шизофрении.
/Б.А.Ташматов, Т.С.Юнусов, И.Казаков и др. // Докл. АН СCCP.
-    1988. - Т.  302, 6. - С.  I507-I5I0.
7.    Ташматов Б.А., Казаков И. Действие сывороточного фактора при шизофрении на бислойные липидные мембрвны. // Узбекский биологический журнал. - 1988, №6. - С. 9-12.
8.    Ташматов Б.А. Роль сывороточного фактора в патогенезе шизофрении. //Клиническая психиатрия Узбекистана. - Ташкент, Р90. - С. 31-34.